Trypsin

Trypsin ist eine Pankreassaftpeptidase, die an der Verdauung von Proteinen beteiligt ist. Es ist eine Serinprotease, die die Peptidbindungen hydrolysiert, die sich auf der C-Seite eines Lysin- oder Argininrests befinden, bei denen es sich um basische Aminosäuren handelt.

Trypsin kommt bei den meisten Tieren vor. Dieses Enzym wird häufig für proteomische Forschungsansätze verwendet, insbesondere zur Charakterisierung und Sequenzierung von Proteinen. Daher wird es hauptsächlich in der Massenspektrometrie verwendet, um Proteine ​​vor der Analyse zu verdauen.

Trypsin wird in der Zellkultur verwendet, um Zellen freizusetzen, die an Kulturflaschen oder Petrischalen haften. Tatsächlich spaltet Trypsin die Adhäsionsmembranproteine ​​und die Zellen werden dann in Suspension gefunden. Diese "Trypsinisierung" wird täglich verwendet, um Zellkulturen zu erhalten (durch Umschalten auf einen größeren Kulturkolben oder durch Multiplizieren der Kolben), um Zellen durch Durchflusszytometrie zu zählen oder um andere Analysen durchzuführen. Diese Behandlung wirkt sich jedoch ein wenig auf die Zellen aus (Lebensfähigkeit, Membranmarker), so dass die Wirkung von Trypsin begrenzt werden muss: Sie wird durch Waschen der Zellen eliminiert und durch die Zugabe von fötalem Kälberserum (Proteine ​​in großem Überschuss von) gehemmt Membranproteine) oder einen spezifischen Inhibitor 2. Alternativ werden andere Enzyme verwendet3.

Trypsin wird auch in der Immunhämatologie zum Nachweis unregelmäßiger Antikörper oder sogar während der Etablierung eines Karyotyps verwendet: Zum Beispiel durch Hydrolyse von Histonen und in Kombination mit der Färbung durch Giemsa ermöglicht es das Auftreten von G-Banden auf der DNA und damit die genaue Identifizierung von Chromosomen. Auf diese Weise kann eine Chromosomenanomalie festgestellt werden.

-Synthese

Es wird von der Bauchspeicheldrüse als Trypsinogen (inaktives Proenzym) synthetisiert und dann in den enzymatischen Vesikeln von Azinuszellen gespeichert, aus denen es während der Verdauung ausgeschieden wird. Die Aktivierung von Trypsinogen zu Trypsin resultiert aus der Hydrolyse des Propeptids unter dem Einfluss von Enterokinase oder durch eine selbstaktivierende Wirkung von Trypsin. Cholecystokinin Pancreozymin aktiviert die Sekretion von Enzymen (d. H. Trypsin) in Pankreassaft.