Trypsine

Trypsine is een peptidase van pancreassap dat betrokken is bij de vertering van eiwitten. Het is een serineprotease dat de peptidebindingen hydrolyseert die zich aan de C-kant van een lysine- of arginineresidu bevinden, wat basische aminozuren zijn.

Trypsine wordt bij de meeste dieren aangetroffen. Dit enzym wordt veel gebruikt voor proteomics-onderzoeksbenaderingen, vooral voor de karakterisering en sequentiebepaling van eiwitten. Het wordt dus met name gebruikt in massaspectrometrie om eiwitten te verteren vóór analyse.

Trypsine wordt in celkweek gebruikt om cellen los te maken die aan kweekflessen of petrischalen hechten. In feite splitst trypsine de adhesiemembraaneiwitten en de cellen worden vervolgens in suspensie aangetroffen. Deze "trypsinisatie" wordt dagelijks gebruikt om celculturen in stand te houden (door over te schakelen naar een grotere kweekfles of door de kolven te vermenigvuldigen), om cellen te tellen door middel van flowcytometrie of om andere analyses uit te voeren. Deze behandeling tast de cellen echter een beetje aan (levensvatbaarheid, membraammarkers), dus de werking van trypsine moet beperkt blijven: het wordt geëlimineerd door de cellen te wassen, het wordt ook geremd door de toevoeging van foetaal kalfsserum (eiwitten in grote overmaat op membraaneiwitten ), of een specifieke remmer2. Als alternatief worden andere enzymen gebruikt3.

Trypsine wordt ook gebruikt in de immunohematologie voor de detectie van onregelmatige antilichamen of zelfs tijdens het vaststellen van een karyotype: bijvoorbeeld door histonen te hydrolyseren, en in combinatie met kleuring door Giemsa, maakt het de verschijning van G-banden op het DNA mogelijk en dus de precieze identificatie van chromosomen. Zo kan een chromosomale afwijking worden opgespoord.

-Synthese

Het wordt door de alvleesklier gesynthetiseerd in de vorm van trypsinogeen (inactief pro-enzym) en vervolgens opgeslagen in de enzymatische blaasjes van acinaire cellen van waaruit het tijdens de spijsvertering wordt uitgescheiden. Activering van trypsinogeen tot trypsine is het resultaat van hydrolyse van het propeptide onder invloed van enterokinase of door een zelfactiverend effect van trypsine. Cholecystokinine-pancreozymine activeert de afscheiding van enzymen (dus trypsine) in pancreassap.